Verheije M H 等[21]为获得PRRSV 减毒活疫苗，利用LV株的感染性cDNA克隆，在病毒基因组3′端引入了一系列的缺失。将这些缺失后的全长克隆体外转录后转染BHK­21细胞，细胞培养上清再接种PPAM以检测是否有病毒增殖。结果发现ORF7 编码的核衣壳蛋白C端最多可缺失6个氨基酸而不影响感染性病毒的产生。更进一步的缺失则既不能产生病毒，也得不到包含病毒RNA的病毒样颗粒。3' UTR区紧邻ORF7 区域的缺失分析表明，去除ORF7终止密码子后面的7个核苷酸后，依然能得到感染性的病毒。缺失这一区域的32个核苷酸则完全终止了RNA的复制，从而阻止了感染性病毒的形成。将缺失突变体在PPAM上传代，证实了突变位点的遗传稳定性。此外，这些缺失并未影响重组病毒的体外生长特性，它们的抗原性与野生型病毒相似。缺失N蛋白6个残基突变体的免疫沉淀分析证实截短的蛋白确实较野生型N 蛋白更小。该研究所得到的缺失突变体是很有意义的PRRSV候选疫苗株。   ORF5编码的糖基化囊膜蛋白GP5，又称E蛋白，含有4 个糖基化位点。分子质量为22.4 ku，有6个抗原决定簇，是诱导产生中和抗体的主要结构蛋白，病毒中和作用与抗GP5抗体效价呈显著相关性；GP5还可诱导细胞凋亡。GP5是PRRSV结构蛋白中变异最大的蛋白，同型毒株GP5氨基酸的同源性在88%～99%之间。而欧、美型毒株GP5氨基酸的同源性仅在52%～55%之间。loemba H D等研究表明，E蛋白抗体比其他蛋白抗体产生得早，接种后7 d即可检测到。 5　PRRSV的分子生物学诊断     Verheije M H 等[22]通过在LV株感染性cDNA克隆中插入外源抗原编码序列，首次验证了PRRSV 作为病毒载体的可能性。将人A型流感病毒血凝素(HN)蛋白的一个表位引入LV 的5′端和3′端，分别得到了HA表位和N 蛋白的融合蛋白。此外，5′端含HA表位的重组子，还在HA和ORF7之间另加了一个口蹄疫病毒自剪切蛋白酶2A的编码区，并使它们处于同一读码框内，以确保从杂合的前体中产生有功能的N蛋白。当全长cDNA克隆体外转录出的RNA转染BHK­21细胞后，两个重组子都能复制，能表达HA表位，并能产生子代病毒。然而，将HA 表位直接融合到N蛋白的N端或C端，都影响了重组病毒的存活及其遗传稳定性。重组病毒在PPAM上传代，证实部分病毒在第4代丢失了HA表位。相比之下，以前体切割形式表达HA表位的重组病毒，在第4代时HA表位依然存在。这些病毒的生存都未受到影响。免疫沉淀和脉冲示踪试验表明，2A蛋白酶将HA表位从N蛋白中共转录切割。他们的结果证实了利用PRRSV 作为病毒载体的可行性，即PRRSV也能将其他病原体的抗原传递给猪的免疫系统。 2.2　结构蛋白养猪技术