一、维生素E
(一)鉴别
1.试剂 无水乙醇(GB678-78);硝酸(GB626-78)。
2.操作步骤 称取样品约相当于维生素E15毫克,加无水乙醇10毫升溶解后,加硝酸2毫升摇匀,在75℃加热约15分钟,溶液呈橙红色。
(二)维生素E含量的测定
1.试剂和溶液 95%乙醇;无水乙醇;硫酸(GB625-77);二苯胺(GB681-78):1%(克/毫升)硫酸溶液;硫酸铈(Hg10-2244-82);硫酸铈标准溶液:0.01摩尔/升。
2.测定方法 称取样品约相当于维生素E0.18克(准确至0.0002克),置于100毫升量瓶中,加无水乙醇至刻度。振摇30分钟,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,小心吸取续滤液50毫升,置于回流瓶中,加硫酸3毫升,摇匀,加热回流3小时,冷却后移置于100毫升量瓶中,用无水乙醇反复洗涤容器,洗液放入量瓶中,再加无水乙醇稀释至刻度,摇匀。小心吸取25毫升,加乙醇20毫升,水10毫升,二苯胺硫酸溶液2滴,用0.01摩尔/升硫酸铈标准溶液滴定,滴定速度以每10秒25滴为宜,至溶液由亮黄色转变为灰紫色。持续10秒钟,即为终点。滴定结果用空白试验校正。
3.结果计算
样品所含维生素E相当标示量的百分数X(%):
X(%)=((V1-V2)×F×0.002364×8)/m×K×100=1.8912×(F×(V1-V2))/m×K
式中V1:样品溶液消耗硫酸铈标准溶液的体积,毫升;
V2:空白溶液消耗硫酸铈标准溶液的体积,毫升;
F:硫酸铈标准溶液浓度校正系数;
0.002364:滴定度(每毫升的0.01摩尔/升硫酸铈标准溶液相当于0.002364克的生育酚)
8:样品的稀释倍数;
m:样品质量,克;
K:维生素的标示量。
二、维生素B2
(一)鉴别
1.试剂和溶液 连二亚硫酸钠;冰乙酸;乙酸钠。
2.操作步骤 称取样品约1克,加水100毫升,其溶液在透射光下,显淡黄绿色,并有强烈淡黄绿色荧光;试液分成两份,一份中加入碱溶液,荧光即消失;另一份中加连二亚硫酸钠结晶少许,摇匀后黄色即消退,荧光消失。
(二)维生素B2含量的测定
1.试剂和溶液 冰乙酸;乙酸钠:1.4%溶液。
2.仪器设备 分光光度计,附1厘米比色皿
3.操作步骤 避光操作,称取样品约0.075克(准确至0.0002克),放入烧杯中,加冰乙酸1毫升与水75毫升,加热溶解后,加水稀释,冷却后放入500毫升容量瓶中,再加水稀释至刻度,摇匀后小心吸取10毫升,放入100毫升容量瓶中,加1.4%乙酸钠溶液7毫升,并用水稀释至刻度,摇匀;另取1.4%乙酸钠溶液7毫升于100毫升容量瓶中,用水稀释至刻度,作为空白对照液,在1厘米比色皿内,用分光光度计于444±1纳米波长处测定吸光度。
4.结果计算
维生素B2(%)=(A/323×L×C)×100
式中A:样品在444±1纳米波长处测得的吸光度;
323:维生素B�2在444±1纳米波长处的吸光系数;
L:光路长度,1厘米;
C:100毫升溶液中样品的克数。
三、维生素B1(硝酸硫胺素)
(一)鉴别
1.试剂和溶液 硫酸;硫酸亚铁:取硫酸亚铁结晶8克,加新沸过的冷水100毫升,摇匀溶解,本液应临用新制;冰乙酸;乙酸铅:取乙酸铅10克,加新沸过的冷水溶解后,滴加冰乙酸使溶液澄清,再加新沸过的冷水至100毫升,摇匀待用;氢氧化钠:10%溶液;铁氰化钾:取铁氰化钾1克,加水10毫升溶解。本液应临用新制;异丁醇。
2.操作步骤 取2%样品溶液2毫升,加硫酸2毫升,放冷,缓缓加入硫酸亚铁溶液2毫升,两层溶液接触处产生棕色环。溶解样品约5毫克于乙酸铅溶液1毫升和氢氧化钠1毫升的混合液中,产生黄色;称取样品约5毫克,加氢氧化钠溶液2.5毫升,溶解后加铁氰化钾溶液0.5毫升与异丁醇5毫升,强力振摇2分钟,放置使之分层,上面的醇层显强烈的蓝色荧光,加酸使成酸性,荧光即消失,再加碱使成碱性,荧光又显出。
(二)硝酸硫胺素含量测定
1.试剂和溶液 盐酸;硅钨酸:10%溶液;盐酸:取盐酸5毫升,加水稀释至100毫升;丙酮。
2.操作步骤 称取样品0.05克,准确至0.0002克,加水50毫升溶解后,加盐酸2毫升煮沸,立即滴加硅钨酸溶液4毫升,继续煮沸2分钟,用在80℃干燥至恒重的4#垂熔坩埚滤过,沉淀先用煮沸的盐酸溶液20毫升分次洗涤,再用水10毫升洗涤一次,最后用丙酮洗涤2次,每次5毫升,沉淀物在80℃干燥至恒重。
3.结果计算
硝酸硫胺含量X1按下式表示:
X1(%)=((W2×0.1939)/W1×(1-X2))×100=(19.39×W2)/((1-X2)×W1)
式中W1:样品质量,克;
W2:干燥后沉淀重量,克;
X2:样品干燥失重,重量百分数(%);
0.1939:换算系数。